液相色譜是應(yīng)用最多的色譜分析方法，液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調(diào)整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)；進樣系統(tǒng)要求進樣便利切換嚴密；由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領(lǐng)域。

　　

　　使用液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，最后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質(zhì)。液相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒有本質(zhì)的差別，它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和微粒固定相，適于分析高沸點不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機化合物。

 

　　液相色譜系統(tǒng)常見故障及應(yīng)對措施：

　　1、柱壓高：

　　原因：緩沖液鹽分沉積于柱內(nèi)；或者是樣品污染沉積。

　　措施：如果是緩沖液鹽分沉積于柱內(nèi)，則用40～50℃的純水低速正向沖洗柱子，逐漸提高流速沖洗，柱壓大幅度下降后再用常溫純水清洗，最后用純甲醇沖洗柱子30分鐘。

　　如果是樣品污染沉積導(dǎo)致，則用純水反向沖洗柱子，再用甲醇沖洗，隨后用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子，再用甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后用甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘。

　　

　　2、氣泡溢出：

　　原因：主要是由于過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，內(nèi)部霉菌繁殖形成菌團阻塞了過濾器導(dǎo)致。

　　措施：將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，利用超聲清洗既分鐘。或者將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時，再用純水清洗，打開purge鍵清洗脫氣，直到?jīng)]有氣泡冒出。打開泄壓閥，打開泵，純水沖洗過濾器1小時左右。

　　

　　3、無壓力指示，也無液體流過：

　　原因：泵密封墊圈磨損；或大量氣泡進入泵體。

　　措施：更換密封墊圈，或用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

　　

　　4、壓力波動大，流量不穩(wěn)定：

　　原因：系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物。

　　措施：觀察流動相的量，動相要充分脫氣。如果是單向閥和閥座不能密封，則拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

　　

　　5、峰面積重復(fù)性不佳：

　　原因：進樣閥漏液；或加樣針不到位，或者是液量不足。

　　

　　6、出峰不佳，峰分叉：

　　原因：色譜柱被污染，或者柱頭填料塌陷。

　　措施：色譜柱被污染則需清洗色譜柱。如果柱頭填料塌陷或硬結(jié)，則去除硬結(jié)部分，沖新裝入新填料。反復(fù)滴甲醇，壓緊不銹鋼桿，直至填滿。柱頭用甲醇沖洗干凈。